应用二/三代测序技术的论文数量对比(截至2019.1)
2023-08-22 08:15:23
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图7 受到美国互惠关税影响最大的五种农业食品产品
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其主要步骤及原理为:1)文库制备(SMRT-bell):待测 DNA 片段化后,双链两端连接发夹接头形成闭合的环状单链模板;2)测序:将 SMRT-bell 加到芯片载体(SMRTCell),扩散进入其上密布的 50~100nm 测序单元(ZMW,零模波导孔),由于 ZMW 外径比激发光波长(数百纳米)小,DNA 分子进入后,激发光从孔底发出的光不能穿透 ZMW 进入上方溶液区,被限制在底部足以覆盖被检测 DNA 部分的区域,从而收集该区域信号,由于孔外过多游离核苷酸单体仍然留在黑暗中,故可实现将背景噪音降到最低。SMRT 测序速度明显快于 NGS,可实现每秒约 10 个 dNTP,但通量较低(1 个 SMRT 芯片池中的 15 万个 ZMW 中只有约 3.5~7万个可进行有效测序)。此外,SMRT 的连续碱基测序错误率较高(11%~15%),但其错误具随机性(不同于 NGS 的偏向性),可通过多次重复纠正,一般 15 次连续碱基测序的准确性可提升至 99%。
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